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看完这些你就知道质粒的应用技术了
浏览次数:22发布日期:2020-03-13
  今天让我们一起来了解一下质粒的应用技术
 
  了解了质粒的结构和它的构建过程之后,我们来看质粒在基因工程中的应用。
 
  pBR322质粒作为一种常用的基因克隆载体,在实际应用中有着非常重要的地位,其中一个突出的例子就是应用pBR322 作为克隆载体对水稻的叶绿体光诱导基因psbA 进行结构分析。
 
  将水稻叶绿体的DNA,用EcoRI核酸限制性内切酶消化之后,放入含有溴化乙锭的低熔点(LMP)的1%琼脂糖凝胶中作电泳分离。
 
  从LMP中分离出分子大小为1.8~2.5kb之间的DNA片段,再与同样经过了EcoRI核酸限制性内切酶切割并用碱性磷酸酶作了脱磷酸处理的pBR322质粒连接。
 
  然后,将混合物转化到大肠杆菌5346菌株,培养在氨苄青霉素选择平板上,形成Ampr转化子菌落群体。这样就构成了由EcoRI核酸限制性内切酶切割的水稻叶绿体DNA基因组库。
 
  用Ampr转化子菌落与32P放射性标记的玉米psbA DNA 探针作菌落杂交,可以分离出其中的阳性克隆体。从这些阳性克隆体中分离出来的重组体质粒DNA,经过进一步的分析,就能测出水稻叶绿体基因psbA的序列。
 
  利用pBR322作为载体重组人体的抑生长激素也是一个经常提到的应用例子。其过程和水稻叶绿体基因重组大同小异,只是除了在质粒载体上插入抑生长激素基因外,还将含有lac操纵子起始部分的片段(包括启动子、操纵区、核糖体结合位点和β-半乳糖苷酶的主要部分)插在抑生长激素基因的旁边。
 
  由于有了lac操纵子的控制,重组基因产生的蛋白质的调节就变得比较容易了。
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